菲羅門色譜柱死體積狹義上指的是色譜柱中未被固定相占據的空隙體積,即色譜柱內流動相的體積。廣義上的死體積是指進樣位置(進樣口)到檢測位置(檢測器流通池)這一段的體積(PS:除去色譜柱中填料體積),一旦色譜柱連接,這段體積(圖示橙色管路)是不變的(死的)。
HPLC中菲羅門色譜柱死體積該如何計算:
死體積(deadvolume,V0)——由進樣器進樣口到檢測器流動池未被固定相所占據的空間。它包括4部分:進樣器至色譜柱管路體積、柱內固定相顆粒間隙(被流動相占據,Vm)、柱出口管路體積、檢測器流動池體積。其中只有Vm參與色譜平衡過程,其它3部分只起峰擴展作用。為防止峰擴展,這3部分體積應盡量減小。
死時間(deadtime,t0)——不保留組分的保留時間。即流動相(溶劑)通過色譜柱的時間。
測量系統死體積通常需要通過實驗進行測量,常用方法是通過進一針和色譜柱固定相沒有任何作用的特殊溶液(方法中會有規定,例如:尿嘧啶,少量NaNO3或甲醇溶于流動相得到的溶液,也有直接用100%色譜純甲醇進樣的情形)時,就會得到一個色譜峰,由此峰可以測得死時間(t0),這就是t0的實測結果。
然后通過計算得到系統死體積:
死體積(V0)=死時間t0×流動相的流速F。